Il museo - allestito nei locali della Porta S.Paolo fondata nel III secolo d. C. e strutturata sui due fornici da cui prendevano avvio la via Ostiense e l’antica via Laurentina - illustra la strada che congiungeva Roma a Ostia, attraverso l’esposizione di calchi di iscrizioni e rilievi relativi al percorso ed ai vari monumenti collocati sull’antica via.
Sono inoltre esposte piante antiche e moderne, stampe e fotografie, mentre in una sala in cui restano tracce di affreschi di epoca medievale,sono raccolte memorie cristiane della via Ostiense e di Ostia ed alcuni pezzi provenienti da catacombe. Di particolare interesse le proposte ricostruttive di alcuni edifici ostiensi tra i quali il cosiddetto Piccolo Mercato.